Аутоантитела к клеткам островков Лангерганса // Isletest-ICA ELISA

Назначение

Isletest-ICA представляет собой иммуноферментный тест для качественного определения циркулирующих аутоантител класса IgG к клеткам островков Лангерганса (Islet Cell Autoantibodies, ICA) в сыворотке крови человека. Тест может быть использован для ранней диагностики инсулинозависимого диабета и выявления предрасположенности к данному заболеванию.

Введение

Инсулинозависимый диабет (ИЗД), или диабет первого типа, представляет собой широко распространенное хроническое заболевание, характеризующееся нарушением синтеза и секреции инсулина, который является основным регулятором метаболизма глюкозы в периферической крови. Инсулин синтезируется и секретируется специализированными клетками поджелудочной железы, так называемыми β-клетками островков Лангерганса. Выработка специфических аутоантител к β-клеткам островков Лангерганса ведет к разрушению последних по механизму антител-зависимой цитотоксичности, что приводит, в свою очередь, к нарушению синтеза инсулина и клиническим признакам ИЗД. Аутоиммунные механизмы разрушения клеток могут иметь наследственную природу и/или запускаться некоторыми внешними факторами, такими как вирусные инфекции, воздействие токсических веществ и различные формы стресса. ИЗД характеризуется наличием асимптоматического периода, который может длиться в течение нескольких лет. Нарушение синтеза и секреции инсулина в этот период может быть выявлено только с помощью тестов определения толерантности к инсулину. В большинстве случаев у лиц с асимптоматическим течением ИЗД выявляются аутоантитела к клеткам островков Лангерганса (ICA) и/или антитела к инсулину (Iinsulin Autoantibodies, IAA). Описаны случаи выявления ICA за 8 и более лет до появления клинических признаков ИЗД, таким образом определение уровня ICA может служить для ранней диагностики и выявления предрасположенности к ИЗД. У пациентов с наличием ICA наблюдается прогрессивное снижение функционирования β-клеток, что проявляется в нарушении ранней фазы секреции инсулина. При полном нарушении этой фазы секреции появляются клинические признаки ИЗД. Исследования показали, что ICA определяются у 70% больных с впервые выявленным ИЗД, в то время как в контрольных недиабетических группах ICA выявляются в 0,1-0,5% случаев. ICA также выявляются у лиц с преддиабетическими нарушениями синтеза инсулина. Эти лица составляют группу повышенного риска для развития ИЗД. Исследования, проведенные рядом ученых показали, что у пациентов с преддиабетическими нарушениями синтеза инсулина и наличием ICA в последующем развивается ИЗД. Высокая прогностическая значимость определения ICA определяется тем, что у пациентов с наличием ICA даже при отсутствии каких- либо признаков нарушения синтеза инсулина, в конечном счете, тоже развивается ИЗД. Таким образом, определение уровня ICA является чрезвычайно полезным для ранней диагностики и выявления предрасположенности к ИЗД. Riley и др. показали, что определение уровня ICA у больных с инсулиннезависимым диабетом (диабет второго типа), может помочь выявить развивающуюся инсулиновую зависимость еще до появления соответствующих клинических симптомов и определить необходимость терапии инсулином. Таким образом, у больных диабетом второго типа при наличии ICA можно с большой вероятностью предположить наличие скрытой инсулиновой зависимости. Определение уровня ICA в периферической крови важно для выявления в популяции лиц и их родственников, имеющих генетическую предрасположенность к ИЗД. Все это определяет актуальность создания ИФА методик определения ICA. До недавнего времени определение уровня ICA основывалось на методах гистохимии и непрямой иммунофлуоресценции с использованием в качестве субстрата замороженных нефиксированных срезов поджелудочной железы, полученных от приматов или грызунов. Методы были впервые предложены в 1974 году. Несмотря на многочисленные попытки усовершенствования и модификации процедур исследования, ряд методических проблем остался нерешенным. Большое затруднение вызывает стандартизация исследований. Достоверность результатов данных исследований ограничивается такими факторами, как различия биологического материала (срезы поджелудочной железы), ограниченная жизнеспособность клеток нефиксированных образцов и сложности в получении соответствующих тканей. Исследователями фирмы Biomerica были идентифицированы и очищены антигены β-клеток островков Лангерганса, на основе которых была разработана иммуноферментная методика определения ICA. 

Принцип метода

Тест основан на принципе твердофазного непрямого иммуноферментного анализа. Высокоочищенная смесь антигенов панкреатических клеток адсорбирована в лунках стандартного микропланшета. При внесении контролей и разведенных исследуемых сывороток в лунки присутствующие в них антитела к клеткам островков Лангерганса связываются с иммобилизованными антигенами. Несвязавшиеся антитела удаляются промывкой. После этого в лунки вносятся антитела к IgG человека, меченые ферментом (конъюгат), которые связываются с комплексом «антиген-антитело», иммобилизованным на поверхности лунок. Несвязавшийся конъюгат удаляется промывкой. Добавление субстрата приводит к развитию окраски, интенсивность которой прямо пропорциональна концентрации ICA. Полученные результаты оцениваются путем сравнения с точкой отсечения (cut-off). Положительный контроль служит для встроенного контроля качества и подтверждения достоверности результатов.

Инструкция

7010 Аутоантитела к клеткам островков Лангерганса (IsletestTM - ICA) (PDF, 255 Кб)

(Производитель может вносить изменения в инструкцию по применению. За версией инструкции для конкретного лота диагностического набора/реагента обращайтесь в отдел продукции ЗАО "Аналитика")

Регистрационное удостоверение

Наборы реагентов in vitro для иммулогических исследований методом ИФА (№ ФСЗ 2009/04987 от 25.06.2012)