Адренокортикотропный гормон, АКТГ
Назначение
ИФА тест Biomerica АКТГ (Biomerica ACTH ELISA) предназначен для количественного определения адренокортикотропного гормона в плазме крови человека. Только для in vitro диагностики.
Введение
АКТГ (адренокортикотропный гормон, кортикотропин) является пептидным гормоном с молекулярным весом 4500, состоящим из 39 аминокислот. Он секретируется гипофизом и регулирует продукцию стероидных гормонов корой надпочечников. Секреция АКТГ передней долей гипофиза контролируется как классическим механизмом обратной связи, так и центральной нервной системой посредством стрессорных медиаторов.Различные типы стресса или боли воспринимаются при повышении уровней регулируемой мозгом секреции гипоталамического нейросекреторного гормона, кортикотропин-высвобождающего гормона (corticotropin releasing hormone, CRH), состоящего из 41 аминокислоты. CRH стимулирует секрецию гипофизом АКТГ. Вторым пептидом, контролирующим секрецию АКТГ, является вазопрессин (AVP). Выделение вазопрессина также стимулируется стрессом и оказывает синергетический эффект совместно с CRH, усиливая секрецию АКТГ в систему кровообращения гипофиза. АКТГ увеличивает синтез и высвобождение всех стероидов надпочечников, альдостерона, кортизола и андрогенов надпочечников. Это главный модулятор кортизола, наиболее важного глюкокортикоида человека. При повышении уровня кортизола в крови высвобождение АКТГ ингибируется непосредственно на уровне гипофиза. Посредством этого же механизма снижение уровней кортизола приводит к повышению уровней АКТГ. Биологически активный АКТГ образуется при расщеплении большой молекулы предшественника, про-опиомеланокортина (РОМС). В структуре этой молекулы содержатся аминокислотные последовательности АКТГ, про-АКТГ, β-меланоцитостимулирующего гормона, липотропина, а также эндорфина и энкефалинов. Поскольку реакционоспособность в иммуноанализах предопределяется антигенной структурой, а не биологической функцией, в обычной тест-системе АКТГ РИА выявляется реакция с РОМС, про-АКТГ, АКТГ и некоторыми фрагментами АКТГ. 5 Секреция АКТГ, как и других гипофизарных гормонов, происходит пульсирующе. Небольшие выбросы складываются в характерные суточные колебания большей амплитуды. У здоровых людей концентрация АКТГ достигает пика ранним утром (6:00 – 8:00 часов), а минимума – в поздние дневные часы и в начале периода сна. Из-за этого суточного ритма принято брать образцы плазмы крови для определения АКТГ между 8:00 и 10:00 часами. Однако для дифференцировки пациентов с болезнью Кушинга и здоровых людей предпочтительно использовать образцы плазмы, взятые вечером (16:00 – 18:00 часов). При болезни Кушинга и синдроме эктопического АКТГ суточные колебания секреции АКТГ обычно отсутствуют. Стресс также может перекрыть суточные колебания.
Клиническое значение
Определение концентрации АКТГ в плазме крови используется для дифференциальной диагностики гипофизарной болезни Кушинга, болезни Аддисона, гипофизарных опухолей, автономно продуцирующих АКТГ (например, синдром Нельсона), гипопитуитаризма с недостаточностью АКТГ и синдрома эктопического АКТГ. Синдром Кушинга возникает под действием избытка глюкокортикоидов. Во всех случаях синдрома Кушинга, за исключением лечения глюкокортикоидами, происходит увеличение концентрации кортизола в суточной моче. Наиболее часто причиной синдрома Кушинга является двусторонняя гиперплазия надпочечников из-за гиперсекреции гипофизарного АКТГ (болезнь Кушинга) при аденоме гипофиза или кортикотропной гиперплазии. Лабораторная диагностика болезни Кушинга основывается на следующем: (1) понижение концентрации АКТГ и кортизола в плазме крови при введении высоких доз (2,0 мг каждые 6 ч х 8) дексаметазона; (2) отсутствие подавления АКТГ и кортизола при введении низких доз (0,5 мг каждые 6 ч х 8 или 1 мг в 23:30 часа) дексаметазона; (3) больший, чем в норме, ответ на стимуляцию метирапоном (metyrapone) (метопироном, Metopirone) и нормальные или повышенные уровни АКТГ в плазме крови. Если синдром Кушинга вызван первичной аномалией надпочечников (аденомой или карциномой), то надпочечник действует независимо от АКТГ, и секреция гипофизарного АКТГ подавляется. Таким образом, не будет ответа на супрессию дексаметазоном или стимуляцию метирапоном. Этот тип синдрома Кушинга характеризуется очень низкими или неопределяемыми уровнями АКТГ. Следовательно, измерение концентрации АКТГ в плазме крови способствует дифференциальной диагностике гипофизарного синдрома Кушинга. У пациентов с опухолями надпочечников уровни АКТГ низкие. Высокие концентрации АКТГ наблюдаются у пациентов с синдромом эктопического АКТГ. Пациенты с двусторонней гиперплазией надпочечников будут иметь уровни АКТГ непропорционально высокие для имеющейся у них степени гиперкортизолизма, который должен подавлять АКТГ. Однако в большинстве случаев концентрации АКТГ будут в пределах нормальных значений. Недостаточность коры надпочечников или недостаточная выработка кортизола может быть вызвана деструкцией коры надпочечников или аномалиями гипофиза или гипоталамуса. Результатом является недостаточная продукция и секреция АКТГ. Для первичной недостаточности коры надпочечников, болезни Аддисона, свойственно значительное повышение уровней АКТГ в плазме крови и неспособность надпочечников отреагировать на стимуляцию экзогенным АКТГ. Гипопитуитаризм с пониженным уровнем АКТГ, являющийся вторичной недостаточностью коры надпочечников, характеризуется низкими концентрациями АКТГ и кортизола в плазме крови и субнормальным, хотя обычно регистрируемым, ответом надпочечников на стимуляцию синтетическим АКТГ (кортрозином, Cortrosyn®). Если для постановки диагноза требуется гипогликемический стресс или стимуляция метирапоном, реакция АКТГ и кортизола бывает ниже, чем в норме. Агрессивные и инвазивные продуцирующие АКТГ гипофизарные опухоли, обнаруживаемые до или вслед за двусторонней адреналэктомией при болезни Кушинга (синдром Нельсона), характеризуются развитием Аддисоновой пигментации. Часто это происходит у пациентов с удаленными надпочечниками, принимающими адекватную глюкокортикоидзамещающую терапию. У этих пациентов уровни АКТГ в плазме крови значительно повышены, ответ на супрессию дексаметазоном снижен.
Принцип метода
Тест Biomerica АКТГ (Biomerica ATCH ELISA) является твердофазным иммуноферментным анализом (ИФА) «сэндвич»-типа, и предназначен для определения концентрации биологически активной цепи АКТГ, состоящей из 39 аминокислот. В тесте используются козьи поликлональные антитела к АКТГ человека, очищенные с помощью аффинной хроматографии, и мышиные моноклональные антитела к АКТГ человека, специфичные к строго определенным областям молекулы АКТГ. Одному, биотинилированному, антителу придано свойство связываться только с С-концевыми 34-39 аминокислотами молекулы АКТГ. Другому антителу придано свойство связываться только с центральной областью и N-концевыми 1-24 аминокислотами молекулы АКТГ; это антитело мечено пероксидазой из корня хрена (HRP) для проявления. В данном анализе калибраторы, контроли или образцы плазмы крови пациентов одновременно инкубируют с конъюгированными с ферментом антителами и меченными биотином антителами в лунках микропланшета, покрытыми стрептавидином. После инкубации лунки планшета промывают для удаления несвязавшихся компонентов. Фермент, связавшийся с твердой фазой, инкубируют с субстратом, тетраметилбензидином (ТМБ). Реакцию останавливают добавлением в лунки кислотного стоп-реагента, при этом цвет раствора становится желтым. Интенсивность желтого окрашивания прямо пропорциональна концентрации АКТГ в образце. По калибраторам строится кривая зависимости оптической плотности от концентрации АКТГ. По этой калибровочной кривой определяют концентрацию кальцитонина в контролях и исследуемых образцах.
Инструкция
7023 АКТГ (адренокортикотропный гормон) (ACTH (Adrenocorticotropic Hormone) ELISA) (PDF, 293 Кб)
(Производитель может вносить изменения в инструкцию по применению. За версией инструкции для конкретного лота диагностического набора/реагента обращайтесь в отдел продукции ЗАО "Аналитика")
Наборы реагентов для лабораторной диагностики in vitro (№ ФСЗ 2009/04987 от 25.06.2012)