RIDASCREEN Entamoeba histolytica /энтамёбы, амёбиаз/
Назначение
Тест RIDASCREEN® Энтамеба (RIDASCREEN® Entamoeba) – диагностическая in vitro тест-система для выявления Entamoeba histolytica sensu lato в образцах кала.
Введение
В целом заражению Entamoeba histolytica sensu lato подвергаются ежегодно до 500 миллионов человек. Молекулярно-генетические исследования показали, что простейшее Entamoeba histolytica (дизентерийная амеба), идентифицированное обычными диагностическими методами, включает два морфологически неотличимых вида: патогенный Entamoeba histolytica sensu lato и, согласно современному уровню знаний, непатогенный Entamoeba dispar. Около 90% инфекций Entamoeba вызвано E. dispar. Но именно E. histolytica является причиной заболевания амебными колитами и абсцессами печени 40 – 50 миллионов людей, причем 80000 – со смертельным исходом. Жизненный цикл энтамебы относительно прост. Инфекция попадает в организм человека через рот при проглатывании четырехядерных цист. Из этих цист в тонком кишечнике развивается одноядерная вегетативная форма паразита. Этот трофозоит (мелкая форма) размножается и дифференцируется главным образом в толстом кишечнике. Принято считать, что инцистирование запускается под воздействием среды нижней части толстого кишечника. Трофозоиты, помимо цист, обнаруживаются в кале лишь в том случае, если он быстро проходит по кишечному тракту. Клинические симптомы амебиаза появляются при проникновении паразитов из полости кишечника в слизистую оболочку мембраны толстой кишки. Здесь часто обнаруживаются трофозоиты с фагоцитированными эритроцитами. Благодаря своим размерам эти трофозоиты описаны как большая форма. В результате инвазии амебы в слизистую оболочку кишки развиваются диарея, дизентерия и даже амебома. Если произошло расселение амебы, могут возникнуть дальнейшие осложнения: абсцессы печени, легких или даже, в редких случаях, мозга. При отсутствии лечения это может привести к гибели человека. Клинические симптомы острой кишечной формы амебиаза – спазмы кишечника с тошнотой и частыми поносами с кровью и слизью в кале. Острая стадия заболевания может перерасти в хроническую с редкими поносами, чередующимися с запорами, болями в области живота, тошнотой и рвотой. Описаны также случаи отсутствия симптомов у зараженных людей, несмотря на секрецию цист. Примерно у 10% людей с острой амебной дизентерией развиваются внекишечные осложнения, такие как абсцесс легких или заболевания других органов. В случае внекишечного амебиаза необходимо серологическое определение антител. С развитием техники микроскопии, позволившей выявлять цисты и трофозоиты в кале, стала возможной диагностика кишечного амебиаза. Поскольку плотность паразитов может быть очень мала, считается, что чувствительность этого метода при исследовнии одного образца кала, даже если анализ проводит очень опытный персонал, около 75%. К тому же существует опасность спутать энтамебу с эпителиальными клетками кишечника, гранулоцитами, макрофагами и грибами. Значительный прогресс может быть достигнут с внедрением чувствительных иммунологических методов исследования, таких как иммуноферментный анализ (ИФА), использующих специфичные антитела к антигенам Entamoeba. Таким образом, диагностика становится независимой от субъективных оценок и более чувствительной, поскольку идентификация больше не основывается на морфологических признаках. Выработка антител вызывается только инвазивной формой энтамебы. Так как титр антител обычно становится определяемым с появлением первых клинических симптомов, для идентификации Entamoeba histolytica можно использовать тест на выявление специфичных антител. К тому же, это позволяет проводить дифференциацию между кишечной и внекишечной формами амебиаза в зависимости от высоты титра, что существенно для выбора метода лечения.
Принцип метода
Тест RIDASCREEN® Энтамеба основан на твердофазном «сэндвич» методе иммуноферментного анализа (ИФА). На поверхности лунок планшета сорбированы специфичные антитела к антигенам Entamoeba histolytica sensu lato. В лунки вносят разведенные образцы кала и контроли. Добавляют конъюгат антител к антигенам E. histolytica sensu lato с пероксидазой из корня хрена и инкубируют при комнатной температуре (20 – 25оС). В результате одновременной инкубации образуется «сэндвич», в котором антиген Entamoeba оказывается между антителами твердой фазы и антителами, мечеными ферментом. Затем лунки отмывают для удаления несвязавшихся меченых ферментом антител. В лунки добавляют субстрат. Если результат теста положительный, фермент, связавшийся с поверхностью лунок, преобразует бесцветный субстрат в голубую жидкость. Добавление стоп-реагента меняет ее цвет на желтый. Оптическую плотность измеряют при длине волны 450 нм (оптимальное значение референтной длины волны > 600 нм). Интенсивность окраски прямо пропорциональна концентрации антигена E. histolytica sensu lato в образце.
Регистрационное удостоверение
Справка ВНИИС
Наборы реагентов для иммунологических исследований (справка ВНИИС) (PDF, 354 Кб)
Инструкция
C 1701 Энтамеба (Entamoeba) (PDF, 255 Кб)
(Производитель может вносить изменения в инструкцию по применению. За версией инструкции для конкретного лота диагностического набора/реагента обращайтесь в отдел продукции ЗАО "Аналитика")